การศึกษาความสามารถในการกำจัดไวรัสของกระบวนการขั้นปลายโมโนโคลนอลแอนติบอดี

Nov 18, 2024

ผลิตภัณฑ์เทคโนโลยีชีวภาพที่ได้มาจากเซลล์ไลน์อาจมีความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนของไวรัส ขอบเขตขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายประการ รวมถึงแหล่งที่มาของการเตรียม วัตถุดิบที่ใช้ ระบบการผลิต รีเอเจนต์การทำให้บริสุทธิ์ และส่วนเติมเนื้อยา การศึกษาการกำจัดหรือการเลิกใช้งานไวรัสในกระบวนการผลิตเป็นขั้นตอนสำคัญในการลดโอกาสการแพร่กระจายของไวรัสที่ทำให้เกิดโรคโดย Iatrogenic และลดความเสี่ยงซึ่งจำเป็นต่อความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์ ก่อนที่ผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพจะสามารถเข้าสู่การทดลองทางคลินิกและจำหน่ายได้ กระบวนการผลิตจะต้องแสดงให้เห็นว่ามีความสามารถในการกำจัดไวรัสที่รู้จักและสันนิษฐานได้

การวิจัยเกี่ยวกับความสามารถในการกำจัดไวรัสมักจะทำได้โดยการเติมไวรัสตัวบ่งชี้ไทเทอร์ที่รู้จักลงในผลิตภัณฑ์ขั้นกลางในขั้นตอนการผลิตที่แตกต่างกัน จากนั้นจึงกำหนดไทเทอร์ไวรัสที่ตกค้างในตัวอย่างที่บำบัดด้วยกระบวนการเฉพาะ และสุดท้ายคือการประเมินค่าการลดบันทึก (LRV) ของไทเตอร์ของไวรัส ขั้นตอนกระบวนการสำหรับ LRV มากกว่าหรือเท่ากับ 4log10 โดยทั่วไปถือว่าเป็นขั้นตอนการกำจัดไวรัสที่มีประสิทธิผล กระบวนการกับ LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

เมื่อใช้วิธีการจำลองกระบวนการผลิต (กระบวนการลด) จำเป็นต้องออกแบบการวิจัยการกำจัด/ยับยั้งไวรัสที่เหมาะสมและแผนการทดสอบที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการผลิตจริงให้มากที่สุด โดยเฉพาะขั้นตอนกระบวนการผลิตที่มีประสิทธิผล กระบวนการจำลองควรสอดคล้องกับกระบวนการจริงอย่างเคร่งครัดในแง่ของพารามิเตอร์การทดสอบและเงื่อนไขการควบคุม

ไวรัสตัวบ่งชี้ทั่วไปแสดงอยู่ในตารางที่ 1

ในขั้นตอนการสมัครยาใหม่ (IND) เชิงสืบสวน ผลิตภัณฑ์เทคโนโลยีชีวภาพจำเป็นต้องมีการศึกษาการกวาดล้างไวรัสสำหรับไวรัสจำลองอย่างน้อย 2 ตัว โดยทั่วไปจะเลือกไวรัสรีโทรไวรัส (X-MuLV) หนึ่งตัวและพาร์โวไวรัส (MMV) หนึ่งตัว ในระหว่างขั้นตอนการขอใบอนุญาตด้านชีววิทยา (BLA) โดยทั่วไปการศึกษาการกำจัดไวรัสจะดำเนินการโดยใช้ไวรัสเฉพาะเจาะจง/ไม่เฉพาะเจาะจง 3-5 และขั้นตอนกระบวนการ 3-5 จะได้รับการประเมินเพื่อแสดงให้เห็นว่าผลิตภัณฑ์มีปัจจัยด้านความปลอดภัยที่เพียงพอจาก มุมมองความปลอดภัยของไวรัส เนื่องจากแนวทางปฏิบัติที่แตกต่างกันทั้งในและต่างประเทศ ขั้นตอนการตรวจสอบการกวาดล้างไวรัสที่ใช้ในการประกาศจึงมีความแตกต่างบางประการ แผนการตรวจสอบการกวาดล้างไวรัสที่ใช้กันทั่วไปในกระบวนการผลิต mAb แสดงไว้ในตารางที่ 2

ในปี 2009 ผลิตภัณฑ์โมโนโคลนอลแอนติบอดีได้ยื่นต่อ FDA สำหรับ IND และ BLA, โครมาโตกราฟีความสัมพันธ์ของโปรตีน A, pH ต่ำ, โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุลบ AEX (โหมดการเจาะทะลุ), โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนบวก CEX (โหมดการจับ - โหมดชะ) และการตรวจสอบความถูกต้องของการกวาดล้างไวรัส ไม่รวม การกรองไวรัสเป็นตระกูลไวรัสตัวบ่งชี้ที่ใช้บ่อยที่สุด และค่าเฉลี่ยและช่วงของผลการกวาดล้างจะแสดงในรูปที่ 1

สำหรับรีโทรไวรัส ยกเว้น CEX ซึ่งมี LRV ประมาณ 3log10 (ดังแสดงในแผนภูมิ A-bar ในรูปที่ 1) กระบวนการอื่นๆ นั้นแข็งแกร่ง (LRV มากกว่าหรือเท่ากับ 4log10) ไวรัสเริมและรีโทรไวรัสมีลักษณะการกวาดล้างที่คล้ายกันและ LRV > 4log10 (ดังแสดงในแผนภูมิ B-bar ในรูปที่ 1) ไวรัสขนาดเล็กที่ไม่มีการห่อหุ้ม เช่น พาร์โวไวรัส จะกำจัดได้อย่างมีประสิทธิภาพยากกว่า มีความทนทานต่อการบำบัดด้วยสารเคมี และไม่ถูกกรองดักจับได้ง่าย (แสดงในแผนภูมิ C-bar ในรูปที่ 1) มีเพียง AEX และตัวกรองไวรัสขนาดเล็กเท่านั้นที่มีประสิทธิภาพในการกำจัดพาร์โวไวรัส (LRV เฉลี่ย > 4log10)

กระบวนการที่แสดงในรูปที่ 1 ได้แก่ ProteinA, AEX (โหมดการเจาะทะลุ), CEX (โหมดการชะล้างร่วมกัน), การยับยั้ง pH ต่ำ (" ไม่สมบูรณ์ "เทียบกับ" การกำจัด "โดยสมบูรณ์") และการกรองกำจัดไวรัสด้วยรูรับแสงขนาดใหญ่และขนาดเล็ก

การกระจายของค่า LRV สำหรับแต่ละกระบวนการแสดงในรูปที่ 2 การศึกษาที่มี 0 ~ 21og10 ถูกจัดประเภทเป็นกลุ่ม LRV ต่ำ และการศึกษาที่มีมากกว่า 6log10 ถูกจัดประเภทเป็นกลุ่ม LRV สูงสำหรับการวิเคราะห์เปรียบเทียบ

ไม่มีความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญระหว่างค่า LRV ของกระบวนการโปรตีน A กับความสมดุล/บัฟเฟอร์การล้าง สารตัวเติม องค์ประกอบของตัวชะ และค่า pH ของการชะล้าง ตัวส่วนร่วมของกลุ่ม LRV ต่ำคือวัตถุดิบตั้งต้นค่อนข้างซับซ้อน และอาจเป็นไปได้ว่าปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนของวัตถุดิบตั้งต้นและสารตัวเติมส่งผลเสียต่อความสามารถของคอลัมน์โครมาโตกราฟีในการกำจัดไวรัส

สเตราส์และคณะ แสดงให้เห็นว่าค่า pH และสภาพนำไฟฟ้าของตัวอย่าง AEX สามารถส่งผลต่อ LRV ได้ อย่างไรก็ตาม ผลลัพธ์ทางสถิติของ Miesegaes และคณะ แสดงให้เห็นว่า เช่นเดียวกับ ProteinA LRV ของ AEX (โหมดการเจาะทะลุ) ไม่มีความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญกับบัฟเฟอร์ สารตัวเติม pH และค่าการนำไฟฟ้าที่แตกต่างกัน ซึ่งอาจเนื่องมาจากการปรับ pH และค่าการนำไฟฟ้าให้เหมาะสมที่สุด ในเงื่อนไขกระบวนการกรณีที่รายงาน

การกำจัดไวรัสด้วยกระบวนการ CEX นั้นไม่แข็งแกร่งเพียงพอ ไม่มีความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญระหว่าง LRV ในกลุ่ม LRV สูงและบัฟเฟอร์ ระดับประสบการณ์ หรือคุณสมบัติของคอลัมน์โครมาโตกราฟี เช่น ความสูงของคอลัมน์และประเภทของเรซิน อย่างไรก็ตาม ค่า pH สมดุล/การโหลดและการชะล้างที่ใช้ในการศึกษา LRV ที่สูงนั้นต่ำกว่าทั้งคู่ที่ 5.3±0.2; ในกลุ่ม LRV ต่ำ ค่า pH อยู่ที่ 6.0±0.2 อีกปัจจัยหนึ่งคือความเข้มข้นของเกลือในบัฟเฟอร์อาจทำให้เกิดความแตกต่างของค่า LRV ได้เช่นกัน บัฟเฟอร์ที่ใช้ในการศึกษา LRV ต่ำมีความเข้มข้นของเกลือสูงกว่า โดยมีความเข้มข้นเฉลี่ย 290±120 มิลลิโมลาร์ในสารละลายในการโหลด/ปรับสมดุล และ 340±70 มิลลิโมลาร์ในตัวชะ ในขณะที่ความเข้มข้นของ NaCl ในการศึกษา LRV สูงคือ 58 ±27 มิลลิโมลาร์ และ 183±31 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ

ในกระบวนการ pH ต่ำ pH เป็นพารามิเตอร์กระบวนการที่สำคัญ และค่า pH 3.8 ก็เพียงพอที่จะยับยั้งรีโทรไวรัสตามระดับ กลุ่ม LRV ต่ำมีค่า pH 3.9 ในขณะที่การศึกษา LRV สูงมีค่า pH 3.4

สำหรับฟิลเตอร์รูรับแสงทั้งขนาดเล็กและขนาดใหญ่ ค่า LRV ของการลบ MuLV จะต้องไม่น้อยกว่า 2log10 และมีเพียง 1% ของการศึกษาเท่านั้นที่ต่ำกว่า 3log10 (แสดงในคอลัมน์ h และ i ในรูปที่ 2) การกวาดล้างไวรัส retroviruses โดยรวมโดยตัวกรองไวรัสที่มีรูรับแสงขนาดใหญ่นั้นต่ำกว่าตัวกรองไวรัสที่มีรูรับแสงขนาดเล็ก (ดังแสดงในแผนภูมิ C-bar ในรูปที่ 1) สาเหตุหลักที่ส่งผลต่อผลลัพธ์ของการกำจัดพาร์โวไวรัสก็คือตัวกรองประเภทต่างๆ โดยทั่วไป การกรองแอนตี้ไวรัสสามารถกำจัดไวรัสได้อย่างน่าเชื่อถือ

กระบวนการได้แก่ โปรตีน A(a), โหมดการเจาะ AEX (b), การจับ CEX - โหมดการชะ (c), การจับ AEX Ⅰ โหมดการชะ (d), การปิดใช้งาน pH ต่ำ (" ไม่สมบูรณ์ "และ" การกวาดล้างโดยสมบูรณ์) (e ~ g) และขนาดรูพรุนขนาดใหญ่ (h) และขนาดรูขุมขนเล็ก (i ~ j) การกรองไวรัส (โดยที่ a ~ i: Retrovirus; j: Parvovirus)

การพัฒนาและนวัตกรรมอย่างต่อเนื่องในด้านกระบวนการชีวเภสัชภัณฑ์ขั้นปลายจะนำมาซึ่งนวัตกรรมในการประเมินการกวาดล้างไวรัสอย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ ความก้าวหน้าในกระบวนการต้นน้ำและปลายน้ำ เช่น กระบวนการทางชีวภาพแบบต่อเนื่อง ทำให้มีความจำเป็นในการประเมินและสร้างกระบวนการกำจัดไวรัสที่มีประสิทธิภาพและแข็งแกร่ง ในระหว่างการไหลอย่างต่อเนื่อง ขั้นตอนต่างๆ เช่น การหยุดการทำงานของไวรัสและการกรองไวรัส ยังคงคาดว่าจะดำเนินการในโหมดแบทช์ แม้ว่าความสามารถในการกำจัดไวรัสของกระบวนการโครมาโตกราฟีในโหมดการไหลต่อเนื่องไม่ควรแตกต่างอย่างมากจากการประมวลผลแบบแบตช์ แต่ข้อมูลจะต้องได้รับการสนับสนุน

จากมุมมองด้านความปลอดภัยทางไวรัสวิทยา ความปลอดภัยที่เป็นเลิศของอุตสาหกรรมชีวเภสัชภัณฑ์ส่วนใหญ่เป็นผลมาจากการที่อุตสาหกรรมยึดมั่นอย่างเข้มงวดต่อกลยุทธ์สำคัญ 3 ประการเพื่อความปลอดภัยของไวรัส ได้แก่ การจัดหาและการทดสอบแหล่งวัสดุและธนาคารเซลล์อย่างเพียงพอ บันทึกการประเมินการกวาดล้างไวรัส (การศึกษาการตรวจสอบความถูกต้องของไวรัส) และ การทดสอบไวรัสในกระบวนการ ลักษณะของยาชีวภาพที่ผลิตโดยซับสเตรตของเซลล์ใหม่อาจเปลี่ยนแปลงไปตามความเสี่ยงที่แตกต่างกัน และจำเป็นต้องมีกลยุทธ์การจัดการความเสี่ยงที่ดีเพื่อให้มั่นใจในความปลอดภัยของยาชีวภาพ Guidling Technology มีทีมงานด้านเทคนิคมืออาชีพที่มีประสบการณ์ ครอบคลุมกระบวนการกรองตั้งแต่การทดลองขนาดเล็ก การทดลองนำร่อง ไปจนถึงการผลิตขนาดใหญ่ ตัวกรองเมมเบรนและเมมเบรนของเราถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการกรองเบื้องต้น การกรองแบบไมโคร การกรองแบบอัลตราฟิลเตรชัน ความเข้มข้นของนาโนฟิลเตรชัน การสกัดและการแยก กลุ่มผลิตภัณฑ์มากมายของเรา ตั้งแต่การกรองแบบใช้ครั้งเดียวขนาดเล็กในห้องปฏิบัติการไปจนถึงระบบการกรองที่มุ่งเน้นการผลิต การทดสอบความปลอดเชื้อ การหมัก การเพาะเลี้ยงเซลล์ และอื่นๆ ช่วยให้มั่นใจได้ถึงประสิทธิภาพการผลิตที่เพิ่มขึ้น

Jiuling รับรองคุณภาพผลิตภัณฑ์เป็นตัวบ่งชี้แรก ในการแสวงหา "ลดต้นทุน เพิ่มประสิทธิภาพ" บนท้องถนนเพื่อสำรวจ รอคอยที่จะทำงานร่วมกับคุณในอนาคตเพื่อเผชิญกับความท้าทายของอุตสาหกรรมและแสวงหาการพัฒนาที่ดีขึ้น

คู่ของ: กรณี แบ่งปัน|กระบวนการรวบรวมวัคซีนที่ง่ายและมีประสิทธิภาพ

ถัดไป: กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ขั้นปลายของวัคซีนโรคอุจจาระร่วงสุกร