DEAE โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุลบแบบอ่อนแอ

DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography – การแนะนำผลิตภัณฑ์

 

1. ภาพรวม

โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนแบบอ่อนแอของ DEAE เป็นเทคนิคการทำให้บริสุทธิ์โดยพิจารณาจากความแตกต่างในคุณสมบัติของประจุและความหนาแน่นของประจุของชีวโมเลกุลต่างๆ เนื่องจากชีวโมเลกุลโมเลกุลส่วนใหญ่มีหมู่ฟังก์ชัน เช่น หมู่คาร์บอกซิลหรือหมู่ไฮดรอกซิล ลักษณะประจุและขนาดจึงสามารถปรับได้โดยการปรับเปลี่ยน pH ของสารละลายบัฟเฟอร์ หลังจากที่ชีวโมเลกุลจับกับไอออนที่มีประจุตรงข้ามหรือตัวกลางแลกเปลี่ยนแคตไอออน การแยกจะเกิดขึ้นได้โดยการเปลี่ยนความแรงของไอออนิกหรือ pH ของเฟสเคลื่อนที่ โมเลกุลที่มีค่าสัมพรรคภาพในการจับน้อยกว่าจะถูกชะออกก่อน ตามด้วยโมเลกุลที่มีค่าสัมพรรคภาพในการจับมากกว่า ดังนั้นจึงสามารถบรรลุการแยกที่มีประสิทธิผลได้สำเร็จ

 

2. ข้อดีของผลิตภัณฑ์

2.1 ประสิทธิภาพสูง: ให้การจับยึดที่แข็งแกร่งที่อัตราการไหลสูงกว่าโครมาโตกราฟีแบบเรซิน-ถึง 40 เท่า เมื่อเปรียบเทียบกับโครมาโทกราฟีแบบเบดแบบบรรจุ-แบบดั้งเดิม โครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนจะช่วยลดเวลาในกระบวนการโดยรวมลงประมาณ 30–40 เท่า

2.2 ประสิทธิภาพการจับยึดสูง: โครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนมีความสามารถในการจับยึดสูงและอัตราการไหลสูงภายใต้แรงดันตกคร่อมต่ำ ทำให้สามารถจับชีวโมเลกุลที่มีประจุได้ในการผ่านคอลัมน์เพียงครั้งเดียว

2.3 ปรับขนาดได้และยืดหยุ่น: ผลิตภัณฑ์โครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนครบชุดสามารถตอบสนองความต้องการในการทำให้บริสุทธิ์ทางชีวโมเลกุลได้หลากหลาย ครอบคลุมทุกขั้นตอนตั้งแต่การพัฒนากระบวนการไปจนถึงการผลิตขนาดใหญ่- การออกแบบโครงสร้างแบบแคปซูล-รองรับทั้งการใช้งาน-แบบใช้ครั้งเดียวและนำกลับมาใช้ใหม่หลังการทำความสะอาด

2.4 ผลผลิตที่ได้รับการปรับปรุง: การออกแบบที่กะทัดรัดช่วยลดพื้นที่ในโรงงาน ด้วยการขจัดการบรรจุคอลัมน์ การทำความสะอาด การตรวจสอบการทำความสะอาด และขั้นตอนการจัดเก็บคอลัมน์ ระบบจึงสามารถดำเนินการได้โดยตรงหลังจากการปรับสมดุลบัฟเฟอร์ โดยไม่ต้องมีการบรรจุหรือจัดเก็บคอลัมน์ สามารถลดต้นทุนค่าแรงได้ถึง 50%

 

3. พารามิเตอร์ทางเทคนิค

3.1 วัสดุโครงสร้าง

	ขนาดห้องปฏิบัติการ	ขนาดเล็ก	ขนาดนักบิน	ขนาดการผลิต
ปริมาณเมมเบรน	0.2มล	5มล	140มล	5L
โครงสร้างรองรับเมมเบรน	โพรพิลีน (PP)
ที่อยู่อาศัยเมมเบรน	โพรพิลีน (PP)
โอริง	ซิลิโคน

3.2 ลักษณะการดำเนินงาน

	ขนาดห้องปฏิบัติการ	ขนาดเล็ก	ขนาดนักบิน	ขนาดการผลิต
ปริมาณเมมเบรน	0.2มล	5มล	400มล	5L
อัตราการไหลที่แนะนำ	1-6 มล./นาที	25-150มล./นาที	2-12 ลิตร/นาที	25-150 ลิตร/นาที
อุณหภูมิการทำงานสูงสุด	35 องศา
แรงดันใช้งานสูงสุด	3bar (25 องศา)
แรงดันต่างสูงสุด	3bar (25 องศา)
สภาพการเก็บรักษา	20%乙醇水溶液 20% สารละลายน้ำเอทานอล

รูปที่ 1 การเปลี่ยนแปลงความสามารถในการโหลดโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนหลังการใช้งานหลายครั้งที่ตรวจสอบด้วย BSA

นอกจากนี้เรายังประเมินประสิทธิภาพการกำจัดโปรตีนเซลล์เจ้าบ้านและกรดนิวคลีอิกโดยใช้โครมาโตกราฟีเมมเบรน DEAE ผลลัพธ์มีดังนี้

	ดีเอ็นเอ				บุคลากรทางการแพทย์
	การกู้คืน IgG	เนื้อหา (pg/mg ของ IgG) โดย RT PCR		ปัจจัยการกำจัด	เนื้อหา (ng/mg ของ IgG) โดย Elisa		ปัจจัยการกำจัด
วิ่ง	%	ก่อน DEAE Membrane	หลังจาก DEAE Membrane	บันทึก	ก่อน DEAE Membrane	หลังจาก DEAE Membrane	บันทึก
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

ตารางที่ 1. อัตราการกำจัด DNA และโปรตีนเซลล์เจ้าบ้านออกจาก CHO- IgG แสดงออกโดยใช้ DEAE เมมเบรนโครมาโตกราฟี

การทดลองหลายชุดแสดงให้เห็นว่าโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรน Q สามารถกำจัดสิ่งเจือปนได้อย่างมีประสิทธิภาพ ขณะเดียวกันก็รักษาอัตราการฟื้นตัวของ IgG เป้าหมายไว้ในระดับสูง

นอกจากนี้เรายังเปรียบเทียบ Gudiling Membrane Chromatography กับแบรนด์นำเข้า และข้อมูลความสามารถในการโหลดมีดังนี้

รูปที่ 2 ประสิทธิภาพการโหลดของโปรตีนต่างๆ บนโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนและผลิตภัณฑ์ของคู่แข่ง

การประเมินโดยรวมแสดงให้เห็นว่าความสามารถในการบรรทุกของเราเทียบได้กับสินค้านำเข้า

รูปที่ 3 ประสิทธิภาพของโมดูลโครมาโทกราฟีแบบเมมเบรน DEAE ในการทดสอบโปรตีนคอลลาเจน

การใช้โมดูลโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรน DEAE ผลการตรวจสอบความถูกต้องแสดงให้เห็นว่าโปรตีนคอลลาเจนเป้าหมายส่วนใหญ่สามารถจับและชะออกได้โดยใช้ NaCl 135 มิลลิโมลาร์

จากการทดสอบภายใต้สภาวะการชะที่แตกต่างกัน เราพบว่าโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนและโครมาโทกราฟีแบบเจลอะกาโรสมีพฤติกรรมการชะที่คล้ายกัน โดยที่ความบริสุทธิ์ของโปรตีนจะแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญภายใต้ความเข้มข้นของเกลือที่ต่างกัน ในการวิจัยและพัฒนาและการผลิตเชิงปฏิบัติ จำเป็นต้องกำหนดเงื่อนไขการชะล้างสมดุลที่เหมาะสมในเชิงปริมาณเพื่อให้ได้โปรตีนเป้าหมายที่มีความบริสุทธิ์สูง-

 

4. กรณีการใช้งานแบบคลาสสิก

กำจัด DNA, ไวรัส, โปรตีนเซลล์เจ้าบ้าน และเอนโดทอกซิน

การจับพลาสมิด ไวรัส กรดนิวคลีอิก และโปรตีน ตลอดจนการทำให้โอลิโกนิวคลีโอไทด์บริสุทธิ์

 

5. ขั้นตอนการดำเนินงาน

5.1:การเตรียมและประกอบอุปกรณ์

5.1.1 ควรติดตั้งโมดูลเมมเบรนโครมาโตกราฟีบนระบบ AKTA โครมาโตกราฟีในลักษณะคล้ายกับคอลัมน์เรซินที่อัดแน่น เพื่อให้แน่ใจว่าทิศทางการไหลสอดคล้องกับลูกศรและทิศทางทางเข้า เชื่อมต่อโดยใช้ขั้วต่อ Luer หรืออุปกรณ์ยึด

5.1.2 ตั้งค่าอัตราการไหลของทางเข้าเป็น 5–10 MV/นาที และใช้บัฟเฟอร์สมดุลเพื่อไล่อากาศ ล้างต่อไปจนกว่าจะไม่พบฟองที่ทางออก จากนั้นเชื่อมต่อช่องจ่ายเพอมิเอตเข้ากับระบบโครมาโทกราฟี

5.2:ก่อนใช้การรักษา

5.2.1: ตั้งค่าอัตราการไหลเข้าเป็น 5–10 MV/นาที และดำเนินการ-บำบัดล่วงหน้าด้วย 0.5 M NaOH เป็นเวลามากกว่า 5 MV เพื่อให้แน่ใจว่าเมมเบรนจะเข้าสู่สภาวะสมดุล

5.2.2: ภายใต้อัตราการไหลเดียวกัน ให้เตรียม-เพิ่มเติมด้วยบัฟเฟอร์การปรับสมดุล (1× PBS) มากกว่า 5 MV เพื่อให้แน่ใจว่าเมมเบรนจะเข้าสู่สภาวะสมดุล

5.3 กระบวนการโครมาโตกราฟี

5.3.1

ตั้งค่าอัตราการไหลของทางเข้าเป็น 5–10 MV/นาที และ-บำบัดด้วยบัฟเฟอร์การปรับสมดุลล่วงหน้ามากกว่า 5 MV จนกว่าเมมเบรนจะเข้าสู่สภาวะสมดุล

5.3.2

หลังจากที่ตัวอย่างถูกกรองล่วงหน้า-ผ่านตัวกรอง 0.22 μm ให้โหลดตัวอย่างจนกว่าการโหลดจะเสร็จสมบูรณ์หรือถึงความสามารถในการโหลดของโครมาโตกราฟี

5.3.3

ล้างด้วยบัฟเฟอร์ปรับสมดุลมากกว่า 10 MV จนกระทั่งการดูดกลืนแสง UV ลดลงถึงระดับพื้นฐาน

5.3.4

ใช้การชะแบบไล่ระดับหรือการชะเชิงเส้นตามการออกแบบกระบวนการ และเก็บตัวอย่างเป็นเศษส่วนตามที่ต้องการ

5.4,CIP Post-ใช้การบำบัด – CIP ของอุปกรณ์โครมาโตกราฟีแบบเมมเบรน

5.4.1

ตั้งค่าอัตราการไหลเข้าเป็น 5–10 MV/นาที และดำเนินการทำความสะอาด-ใน-การบำบัดแบบแทนที่ (CIP) ด้วย 0.5 M NaOH เป็นเวลามากกว่า 10 MV จนกว่าการดูดกลืนแสง UV จะลดลงต่ำกว่าเส้นพื้นฐาน

5.4.2

หลังจากหมุนเวียนการซักเป็นเวลา 30 นาที ให้เปลี่ยนไปใช้การล้างด้วยน้ำจนกระทั่งค่า pH อยู่ระหว่าง 7–8 จากนั้นจึงทำความสะอาดต่อด้วยเอทานอล 20% จนกว่าค่าการนำไฟฟ้าจะยังคงเกือบคงที่

5.5, การจัดเก็บเมมเบรนโครมาโตกราฟี:

หลังจากใช้งานและเสร็จสิ้น CIP แล้ว โมดูลเมมเบรนสามารถถอดออกและจัดเก็บได้โดยการแช่ในเอทานอล 20% หรือจัดเก็บออนไลน์ที่อุณหภูมิห้องในสารละลายเอทานอล 20% ควรตรวจสอบและเปลี่ยนสารละลายเอทานอล 20% เป็นระยะ

 

6.ข้อมูลการสั่งซื้อ

ตัวกรองแคปซูลโครมาโตกราฟีแบบเมมเบรนแลกเปลี่ยนไอออนแบบอ่อนชนิด DEAE-

	ระดับห้องปฏิบัติการ-	ขนาดเล็ก	ขนาดนักบิน	ขนาดการผลิต
รุ่นสินค้า	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
ปริมาณเมมเบรน	0.2มล	5มล	400มล	5L

ป้ายกำกับยอดนิยม: deae อ่อนแอแลกเปลี่ยนไอออนเมมเบรนโครมาโตกราฟี, จีน, ซัพพลายเออร์, ผู้ผลิต, โรงงาน, ขายส่ง, จำนวนมาก, ในสต็อก, ตัวอย่างฟรี